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NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒微量法

簡要描述:NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒微量法輔酶Ⅱ系列公司正在出售的產(chǎn)品:含225ml LB1肉湯均質(zhì)袋 英文名稱:LB1 Broth 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 萘啶酮酸(5.0mg) 英文名稱:Nalidixic Acid 產(chǎn)品規(guī)格:5.0mg/支*5 含225ml FB1增菌液均質(zhì)袋 英文名稱:FB1 Broth 產(chǎn)品規(guī)格:10個/包 FB1(Half-Fraser)添加劑(A、B) 英文名稱:F

  • 產(chǎn)品型號:
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-29
  • 訪  問  量:620

詳細(xì)介紹

商品介紹:

測定意義:

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)生丙酮酸和CO2,以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多,已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測定原理:

NADP-ME催化NADP+還原成NADPH,在340nm下測定NADPH增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

檢測方法

貨號

NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒微量法

100管/96樣

微量法

BK-01S6357

11.png 

實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:

1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物的含量。

2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。

3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:

① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。

② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。

③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。

⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。

操作步驟:

1. 樣品的準(zhǔn)備:

a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。

e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測定。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:

a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。

b. 反應(yīng)啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

2 ug pFastBac1-Gus pFastBac1-Gus 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)(2015藥典) Sabouraud Dextrose Agar 250g

1瓶 C6細(xì)胞株 C6 低溫運(yùn)輸和保存

大腸桿菌/大腸菌群顯色培養(yǎng)基(第二代) E.Coli/Coliform Chromogenic Medium 1000(ML)

300U T7 DNA 聚合(未修飾) T7 DNA Polymerase(unmodified) -20℃保存

500mL Phosphate Buffer,0.2M, pH6.8   Phosphate Buffer,0.2M, pH6.8   常溫保存

0.1mL×10 BL21(DE3)pLysS化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 BL21 (DE3) pLysS Competent Cell -80℃保存

250mL MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   MOPS Buffer,1.0M,pH7.0   常溫保存

1/2MS培養(yǎng)基 1/2MS Medium 250g

1瓶 U-2 OS-Luc teT-on細(xì)胞株 U-2 OS-Luc teT-on 低溫運(yùn)輸和保存

M-肉湯 M-Broth 250g

NADP蘋果酸酶(NADPME)測試盒微量法HDAC5  組蛋白去乙?;?抗體 規(guī)格: 0.1ml

HBXIP  毒X蛋白相互作用蛋白 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-PLK1(Thr210)  磷酸化絲/蘇蛋白激Plk1抗體 規(guī)格: 0.1ml

CHCHD6  卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD6抗體 規(guī)格: 0.2ml

KMT1C/G9a  組蛋白H3賴9甲基化1C抗體 規(guī)格: 0.2ml

PRL  泌素抗體 規(guī)格: 0.2ml

EDG7/LPA3  溶磷脂酸受體蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2ml

SEPT10  細(xì)胞分化蛋白SEPT10抗體 規(guī)格: 0.2ml

ADAMTS7(NT)  整合素樣金屬蛋白與凝1型-7抗體 (N端抗體) 0.1ml

CD177/NB1  嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗體 規(guī)格: 0.2ml

LAS2/C18orf54  肺瘤易蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml

TIEG1/KLF10  TGF-β誘導(dǎo)早期應(yīng)答基因1抗體 規(guī)格: 0.2ml

 


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