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糖原合成酶(GCS)測(cè)試盒微量法

簡(jiǎn)要描述:Hautriwaic acid公司其它產(chǎn)品SELL Others Mouse 小鼠 SELL / CD62L / L-selectin 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 透析袋3000200u
臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C2.4.6-三肖基本磺醋溶液(-20℃) 2,4,6-TRInitnOBqNZqNqSULFONIC cCID 208-19-
7. 肺部細(xì)胞系統(tǒng)硅膠板HF25425U 保存-20

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時(shí)間:2023-12-24
  • 訪  問  量:1131

詳細(xì)介紹

特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱:糖原合成酶(GCS)測(cè)試盒微量法

產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣

檢測(cè)方法:微量法

產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6980

產(chǎn)品分類:糖原系列
商品介紹:

測(cè)定意義:

GCSEC 2.4.1.11)催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,以α-1,4-糖苷鍵相連延長(zhǎng)糖鏈,是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶,是胰島素作用的主要靶酶,對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。

測(cè)定原理:

GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP,丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測(cè)定NADH下降速率,即可反映GCS活性。

需自備的儀器和用品:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

所需的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取

 

細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~10001 的比例進(jìn)行提取。 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

QQ截圖20220307153537.png 

實(shí)驗(yàn)方法學(xué):

一、肝素的配制:

市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。

肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。

二、血液樣本的收集:

全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。

1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。

2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。

選擇抗凝的注意點(diǎn):

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后

用于測(cè)定。

1瓶 Daoy細(xì)胞株 Daoy 低溫運(yùn)輸和保存

TSA平板(9cm) TSA 10個(gè)/包

200U T4 DNA連接(T4 DNA Ligase) T4 DNA Ligase -20℃保存

125mL PIPES Lysis Buffer with NP-40,2X PIPES Lysis Buffer with NP-40,2X 常溫保存

1mL 博萊溶液,10mg/mL Bleomycin Solution -20℃避光保存

2 ug pPICZα B pPICZα B 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

0.4mg無菌水溶液  0.4mg/支*20

2 ug pCAGGS pCAGGS 低溫運(yùn)輸,-20℃保存

副溶血性弧菌瓊脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g

100mg 透明質(zhì)酸 Hyaluronidase -20℃保存

50T 口蹄疫病毒A亞型PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸,-20℃保存

糖原合成酶(GCS)測(cè)試盒微量法Rabbit Anti-dog IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1mlNSMase2  中性鞘磷脂2抗體 規(guī)格: 0.2ml

Calponin 1/COLP  鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體 規(guī)格: 0.1mlMEI-1  減數(shù)分裂缺陷蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

C16orf7/ATP-BL   16號(hào)染色體開放閱讀框7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Shrimp tropomyosin  南美白對(duì)蝦過敏原蛋白(蝦原肌球蛋白)抗體 規(guī)格: 0.1ml

GHDC  GHDC蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Phospho-Met (Tyr1003)  磷酸化肝細(xì)胞生因子受體(原基因)抗體 規(guī)格: 0.1ml

EIF5  真核翻譯起始因子5抗體 0.2ml

Goat Anti-Bovine IgG/Cy3  Cy3標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml

LRFN3/SALM4  神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體 規(guī)格: 0.2ml

LRP12  脂蛋白受體相關(guān)蛋白12抗體(抑制瘤蛋白7) 規(guī)格: 0.2ml

phospho-MARK2(Thr595)  磷酸化絲/蘇蛋白激MARK2抗體 規(guī)格: 0.1ml

ERα/ESR1  雌激素受體α抗體 規(guī)格: 0.1ml 

注意事項(xiàng):

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。

2、對(duì)照管只需要做一管。

3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?

對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。

若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通??梢允箿y(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

 


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